|
Исследование экспрессии генов нейротрофического фактора млекопитающих (ngf) в трансгенной линии дрозофилы, и при их совместной ко-культивации с эмбриональными спинальными ганглиями крысы
М.В. Шутова, н.с., Е.А. Модестова, н.с.
Институт Биологии гена РАН, Лаборатория нейрогенетики и генетики развития. Москва, Россия
Для исследования влияния нейротрофических факторов на нервные клетки была создана трансгенная линия дрозофил Df(1)w67c23(2), экспрессирующих ген нейротрофического фактора мыши NGF.
Для этих целей была создана конструкция на основе вектора pCaSper-hs/act, содержащая ген млекопитающих ngf. Для микроинъекции данной конструкции в геном дрозофилы использовали линию D.melanogaster Df(1)w67c23(2). Получали трансгенные линии, гомозиготные по гену ngf. Путем межлинейного скрещивания получали линию, содержащую ген ngf, ген бактериальной галактозидазы lacZ, а также мутацию Delta (вызывающую трансформацию вентральной и дорзальной нейроэктодермы в нейральном направлении). Контроль наличия вставки осуществлялся с помощью метода блот-гибридизации по Саузерну, контроль экспрессии – по Нозерну. В обоих случаях были использованы зонды, полученные на основе кДНК генов нейротрофинов мыши с использованием случайных праймеров. В опыте была выявлена индуцированная температурой экспрессия мРНК. Определение локализации экспрессии мРНК было проведено методом гибридизации insituна целых эмбрионах.
В экспериментах, проведенных совместно с Кафедрой отоларингологии Каролинского института (Стокгольм, Швеция) была проверена способность трансгенной эмбриональной ткани дрозофилы, содержащей ген ngf, влиять на развитие прогенеторных нервных клеток млекопитающих in vitro. С этой целью фрагменты нейроэктодермы эмбрионов селектированных линий дрозофилы, содержащих трансгены нейротрофического фактора, ко-культивировали с эмбриональными спинальными ганглиями крыс (11-й день эмбриогенеза),
536
« Предыдущая Следующая » 523 524 525 526 527 528 529 530 531 532 |
