ЭКСПРЕССИЯ МАРКЕРА ПРОЛИФЕРАЦИИ (PCNA) КЛЕТКАМИ ФИБРОБЛАСТИЧЕСКОГО ДИФФЕРОНА ПРИ ЗАЖИВЛЕНИИ РАН КОЖИ
М.Н. Чепурненко, преп.
Российская Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова,
Кафедра гистологии (с курсом эмбриологии).
Санкт-Петербург, Россия

Эксперимент проводили на 20 белых беспородных половозрелых мышах-самцах массой 20-30 г. Экспериментальная модель – механическая травма с передачей кинетической энергии снаряда повреждаемым тканям. Взятие материала производили через 6 ч, 24 ч, 3, 6, 15 и 25 суток. Материал для иммуногистохимического исследования был взят с учетом представления о зонах раны (Данилов Р.К. и соавт., 1996). Выведение животных из опыта и проведение болезненных операций осуществлялось под ингаляционным эфирным наркозом в соответствии с положениями приказа МЗ №175 от 12.08.77 г., № 724 от 13.11.84 г. «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных». Изготавливали парафиновые срезы толщиной 4 мкм с последующей иммуногистохимической окраской антителами к пролиферирующему клеточному ядерному антигену (proliferating cell nuclear antigen – PCNA) (клон РС10, «DAКO», Дания). Демаскировку антигена проводили в цитратном буфере (рН=6,0) в бытовой СВЧ - печи «SAMSUNG–M1774R» с использованием следующего режима мощности: 5 мин. – 850 Вт, 1 мин. – перерыв, 2 мин. – 850 Вт, 1 мин. – 300 Вт, 2 мин. – 850 Вт, 4 мин. – 300 Вт, который варьировался в зависимости от времени закипания. Для моноклональных антител к пролиферирующему клеточному ядерному антигену использовали разведение 1:300, согласно рекомендациям фирмы-производителя. Затем срезы обрабатывали вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена, в течение 30 минут. В качестве хромогена использовался 3,3-диаминобензидина тетрахлорид (DAB), входящий в коммерческий набор детекции  EnVision («DAКO», Дания) и дающим продукт красно-коричневого цвета в месте локализации выявляемого антигена. Ядра клеток

503

« Предыдущая     Следующая » 

490 491 492 493 494 495 496 497 498 499