prion protein), находящихся в аномальной конформации. Агрегаты PrP токсичны для нейронов, вызывают их гибель и, как следствие, прогрессирующую дегенерацию нервной ткани, что, в конце концов, приводит к смерти организма. Механизм токсического действия агрегатов PrP неясен. Можно предположить, что он связан с локализацией агрегатов в ядрах клеток, что приводит к нарушению процессов реализации генетической информации и гибели клеток.
Белок PrP при синтезе в клетках дрожжей формирует агрегаты, сходные по своим биохимическим характеристикам c агрегатами из мозга больных млекопитающих. Гибридный белок, в котором последовательность мышиного белка PrP слита с последовательностью зелёного флуоресцентного белка (GFP), также агрегирует в дрожжах, что можно наблюдать с использованием флуоресцентного микроскопа.
Целью работы было выяснить, присутствует ли слитный белок PrP-GFP в ядре дрожжевых клеток.
Штамм дрожжей BY4742 был трансформирован плазмидой PCUP1-PrP-GFP. Трансформанты были отобраны на селективной питательной среде без аминокислоты лейцина. Далее трансформанты выращивались на среде с добавлением сульфата меди для индукции транскрипции с плазмидного промотора CUP1,под контролем которого находилась последовательность гибридного гена PrP-GFP, после чего распределение гибридного белка PrP-GFP было проанализировано под флуоресцентным микроскопом с использованием зелёного светофильтра. Ядро визуализировалось при помощи ДНК-специфического красителя DAPI (синий светофильтр).
Анализ сигналов, полученных с использованием зеленого и синего светофильтров, показал, что эти сигналы не локализуются в одном и том же месте, что свидетельствует об отсутствии агрегатов PrP-GFP в ядре дрожжевых клеток. Это значит, что в белке PrP отсутствуют характерные для дрожжей сигналы ядерной локализации, а также, что токсичность агрегатов PrP у млекопитающих не связана с прямым взаимодействием агрегатов с ядерными структурами.

420

« Предыдущая     Следующая » 

409 410 411 412 413 414 415 416 417 418