Такие данные необходимы для дальнейшего развития заместительной терапии, для использования наиболее подходящих для заживления данной ткани трансплантатов.

Пока не существует способа получения интактного ВКМ, синтезированного клетками в культуре. При использовании ферментов для снятия клеток с субстрата синтезированный клетками ВКМ неизбежно повреждается, что вносит ошибки в даль­нейшую работу с таким матриксом. В настоящей работе предпринята попытка отделения ВКМ от клеток без применения ферментов, что позволяет получить его макси­мально неповрежденным. ВКМ может быть выделен в количествах, достаточных для идентификации компонентов методом электрофореза. Для получения интактного ВКМ разработан метод культивирования фибробластов на гра­нице двух жидких фаз. Основа метода состоит в исполь­зовании в качестве субстрата для клеток перфторированных алканов и третичных аминов (перфторанов). Прове­дено сравнение различных перфторанов по пригодности для культивирования клеток. После культивирования клеток в течение 1—2 сут на поверхности перфторана отделение интактного ВКМ проводили при ультрацентрифугировании в полифазной системе, это позволяет выделить компоненты ВКМ с минимальными повреждениями. Такой результат достигается путем создания допол­нительной, промежуточной между перфтораном и средой, фазы со средними значениями плотности. В работе были использованы первичные и трансформированные фибробласты человека. Перед центрифугированием клетки, вносимые в систему, окрашивали антителами против коллагена I и ламинина, проверяя синтез этих элементов ВКМ. После центрифугирования состав полученного ВКМ определяли методом электрофореза и Вестерн-блота с окраской антителами к основным белкам ВКМ. Было проведено сравнение ВКМ, полученного при снятии клеток с применением ферментов, и полученного вышеуказанным способом. Полученные результаты показывают, что при наличии достаточно малых количеств клеток можно изучать компоненты ВКМ, получая их неповрежденными. В перспективе разработанный нами метод позволит использовать минорные компоненты ВКМ в тканевых клеточных трансплантатах для

365

« Предыдущая     Следующая » 

354 355 356 357 358 359 
360 361 362 363