![]() Главная |
![]() Новости |
![]() Центр |
![]() Специалисту |
![]() Родителям |
![]() F.A.Q |
![]() |
![]() |
|
Непрочитанные вами публикации:
|
ОГЛАВЛЕНИЕ
cпециалисту Родителям Прочее Занятное разное
ПОДПИСАТЬСЯ НА РАССЫЛКУ |
|||
Такие данные необходимы для дальнейшего развития заместительной терапии, для использования наиболее подходящих для заживления данной ткани трансплантатов. Пока не существует способа получения интактного ВКМ, синтезированного клетками в культуре. При использовании ферментов для снятия клеток с субстрата синтезированный клетками ВКМ неизбежно повреждается, что вносит ошибки в дальнейшую работу с таким матриксом. В настоящей работе предпринята попытка отделения ВКМ от клеток без применения ферментов, что позволяет получить его максимально неповрежденным. ВКМ может быть выделен в количествах, достаточных для идентификации компонентов методом электрофореза. Для получения интактного ВКМ разработан метод культивирования фибробластов на границе двух жидких фаз. Основа метода состоит в использовании в качестве субстрата для клеток перфторированных алканов и третичных аминов (перфторанов). Проведено сравнение различных перфторанов по пригодности для культивирования клеток. После культивирования клеток в течение 1—2 сут на поверхности перфторана отделение интактного ВКМ проводили при ультрацентрифугировании в полифазной системе, это позволяет выделить компоненты ВКМ с минимальными повреждениями. Такой результат достигается путем создания дополнительной, промежуточной между перфтораном и средой, фазы со средними значениями плотности. В работе были использованы первичные и трансформированные фибробласты человека. Перед центрифугированием клетки, вносимые в систему, окрашивали антителами против коллагена I и ламинина, проверяя синтез этих элементов ВКМ. После центрифугирования состав полученного ВКМ определяли методом электрофореза и Вестерн-блота с окраской антителами к основным белкам ВКМ. Было проведено сравнение ВКМ, полученного при снятии клеток с применением ферментов, и полученного вышеуказанным способом. Полученные результаты показывают, что при наличии достаточно малых количеств клеток можно изучать компоненты ВКМ, получая их неповрежденными. В перспективе разработанный нами метод позволит использовать минорные компоненты ВКМ в тканевых клеточных трансплантатах для 365
|
![]() |
| |||||